Browsing by Author "Sadowski, Jan. Promotor"
Now showing 1 - 3 of 3
Results Per Page
Sort Options
Item Analiza funkcjonalna kompleksów kinaz map A. thaliana w warunkach stresowych(2011-02-03T13:49:37Z) Gałgański, Łukasz; Sadowski, Jan. PromotorRośliny posiadają bardzo ograniczone możliwości unikania stresu. Rozwinęły więc mechanizmy, umożliwiające adaptację do niekorzystnych warunków środowiska. Kinazy MAP u roślin tworzą jeden z głównych szlaków sygnalizacyjnych, który umożliwia odbiór informacji o zmianach w środowisku. Transdukcja sygnału polega na fosforylacji kolejnych kinaz MAP (MKKK, MKK oraz MPK). Stres biotyczny, abiotyczny (chłodu i osmotyczny) oraz oksydacyjny, a także hormony (ABA, kwas jasmonowy oraz etylen) aktywują przynajmniej jedną z zaledwie trzech kinaz: MPK3, MPK4 lub MPK6. Kinazy te fosforylując swoje substraty, zmieniają ich aktywność, stabilność czy lokalizację komórkową. Efektem jest ukierunkowana odpowiedź na stres, biosynteza hormonów oraz regulacja procesów rozwojowych.Celem badań było poznanie białek oddziałujących z MPK3, MPK4 i MPK6 w warunkach różnych stresów oraz podczas działania hormonów. W tym celu izolowano kompleksy białkowe kinaz, których skład poznawano na drodze spektrometrii mas. Kilka oddziaływań potwierdzono techniką BiFC. Podobnie jak oddziaływania, w różnych warunkach środowiska zmienia się fosforylacja MPK3, MPK4 i MPK6. W celu poznania bezpośrednich substratów kinaz przeprowadzono ich znakowanie za pomocą tiofosforanu, co było poprzedzone mutagenezą kinaz.Item Budowa i funkcja roślinnego kompleksu acetylotransferazy histonowej NuA4(2016) Bieluszewski, Tomasz; Sadowski, Jan. PromotorJednym z głównych mechanizmów wykorzystywanych przez rośliny do regulacji transkrypcji są modyfikacje chromatyny. Drożdżowy kompleks nukleosomalnej acetylotransferazy histonu H4 (NuA4) jest jednym z najintensywniej badanych enzymów modyfikujących chromatynę. Homologi prawie wszystkich podjednostek NuA4 występują także u roślin, jednak dane eksperymentalne na temat roślinnego kompleksu NuA4 są wciąż ubogie. Przedstawiona tu analiza roślinnego kompleksu NuA4 polegała na próbie potwierdzenia fizycznych i funkcjonalnych oddziaływań pomiędzy jego podjednostkami. Strategia eksperymentalna opierała się na połączeniu metod genetycznych (analiza mutantów insercyjnych, edytowanie genomu za pomocą CRISPR/Cas9), biochemicznych (koimmunoprecypitacja) i mikroskopowych (BiFC). Uzyskane wyniki pozwoliły na identyfikację nieznanej wcześniej podjednostki kompleksu oraz na ujawnienie związku funkcjonalnego pomiędzy NuA4 i rozwojem chloroplastów. Przedstawiona praca może się przyczynić do lepszego zrozumienia budowy i funkcji roślinnego kompleksu NuA4 poprzez rozszerzenie repertuaru znanych podjednostek oraz funkcji tego enzymu. Możliwy udział roślinnego kompleksu NuA4 w regulacji działania aparatu fotosyntetycznego na poziomie transkrypcji jest nieoczekiwanym odkryciem, jednak dobrze przystaje do obecnej wiedzy na temat udziału acetylacji histonów w tym procesie.Item Porównawcza analiza udziału pokrewnych kinaz MAPK (MKK1, MKK2, MKK4 i MKK5) Arabidopsis thaliana w odpowiedzi na stres suszy(2010-09-27T08:35:20Z) Krasowski, Krzysztof; Sadowski, Jan. PromotorSpośród wszystkich kinaz białkowych ważną rolę odgrywają kinazy kaskad MAPK. Dość dobrze poznano dwie kaskady: MKKK8–MKK1/MKK2–MPK4 oraz MKKK8–MKK4/MKK5–MPK3/MPK6. W prezentowanej pracy doktorskiej wykonano częściową analizę funkcjonalną pokrewnych kinaz MPK: MKK1–MKK2 oraz MKK4–MKK5. Wyciszenie endogenów wybranych kinaz metodą krótkich spinek RNA (shRNA) spowodowało efekt nadekspresji pokrewnej kinazy. Obserwacja ta sugerowała możliwość wystąpienia kompensacji pełnionych przez nie funkcji. Wątek ten był kontynuowany w trakcie realizacji celu głównego pracy, a więc porównawczej analizy udziału MKK1, MKK2, MKK4 i MKK5 w odpowiedzi na stres suszy. Scharakteryzowano profil transkrypcyjny dla mutantów insercyjnych typu nokaut i porównując go z profilem kontrolnym określono wpływ mutacji, stresu suszy oraz mutacji i stresu suszy na ekspresję 605 genów. Uzupełnieniem prowadzonych badań była ocena aktywności promotorów badanych genów po przeprowadzeniu fuzji promotora z genem reporterowym, kodującym β-glukuronidazę (GUS). Wyniki pokazują wyraźne zróżnicowanie aktywności promotorów badanych genów kinaz w czasie rozwoju rośliny oraz brak różnic w ich aktywności podczas wczesnej fazy odpowiedzi na stres suszy, zranienia i zasolenia. Przedstawione wyniki świadczą o dywergencji funkcjonalnej pokrewnych kinaz (subfunkcjonalizacja) oraz sugerują ich znikomą rolę w odpowiedzi na stres suszy.