Akwaporyny ślimaka winniczka Helix pomatia L. – identyfikacja, charakterystyka i znaczenie w procesie zapadania w stan estywacji
Loading...
Date
2018
Authors
Advisor
Editor
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Title alternative
Aquaporins of the Roman snail Helix pomatia L.: identification, characteristics and contribution to estivation entering
Abstract
Akwaporyny to białka tworzące kanały odpowiedzialne za transport wody i małych cząsteczek pozbawionych ładunku w poprzek błon biologicznych. Pomimo badań potwierdzających ich obecność i znaczenie u organizmów prokariotycznych, jak i eukariotycznych wiedza na temat tych białek u mięczaków jest bardzo ograniczona. Stąd, jako obiekt badań wybrano akwaporyny ślimaka winniczka Helix pomatia L., który jest organizmem modelowym w badaniach fizjologii ślimaków lądowych. Wykonano sekwencjonowanie transkryptomów nogi i nerki tego ślimaka metodą sekwencjonowania nowej generacji (NGS, ang. Next Generation Sequencing), które pozwoliło zidentyfikować sześć sekwencji wykazujących podobieństwo do sekwencji kodujących akwaporyny. Ponadto, przeprowadzono analizę bioinformatyczną otrzymanych danych, jak i oszacowano poziom ekspresji zidentyfikowanych transkryptów, w tym z wykorzystaniem metody qPCR, dla osobników aktywnych i wchodzących w stan estywacji. Eksperyment ten wykazał, że zapadanie w stan estywacji jest procesem dynamicznym, a raz obrany kierunek zmian w poziomie ekspresji genów, nie jest utrzymywany przez cały czas trwania tego procesu. Dodatkowo, przeprowadzono test komplementacji w komórkach mutanta drożdży Saccharomyces cerevisiae pozbawionego funkcjonalnych akwaporyn, który potwierdził, że zidentyfikowane białka transportują wodę.
Transport of water and small uncharged molecules across prokaryotic and eukaryotic cell membranes is supported by aquaporins (AQPs). Nevertheless, molluscs have been very poorly explored in this aspect although several important processes characteristic for the animals, such as osmoregulation, mucus secretion, or defense against desiccation, require AQP participation. Therefore, research on these proteins of Helix pomatia (L), applied as a model in studies on terrestrial snail physiology, were the subject of the studies. These were done by next generation sequencing (NGS) of the snail foot and kidney transcriptome, which revealed the presence of six transcripts identified as aquaporins, consecutive bioinformatic analysis of the predicted proteins as well as the encoding transcript expression estimation including qPCR for active and aestivating specimens. The analysis indicated that the entrance into the aestivation state was a dynamic process as far as HpAQP expression was concerned. Moreover, the predicted protein functional analysis in the yeast Saccharomyces cerevisiae cells depleted of functional AQPs revealed that the predicted proteins are able to transport water.
Transport of water and small uncharged molecules across prokaryotic and eukaryotic cell membranes is supported by aquaporins (AQPs). Nevertheless, molluscs have been very poorly explored in this aspect although several important processes characteristic for the animals, such as osmoregulation, mucus secretion, or defense against desiccation, require AQP participation. Therefore, research on these proteins of Helix pomatia (L), applied as a model in studies on terrestrial snail physiology, were the subject of the studies. These were done by next generation sequencing (NGS) of the snail foot and kidney transcriptome, which revealed the presence of six transcripts identified as aquaporins, consecutive bioinformatic analysis of the predicted proteins as well as the encoding transcript expression estimation including qPCR for active and aestivating specimens. The analysis indicated that the entrance into the aestivation state was a dynamic process as far as HpAQP expression was concerned. Moreover, the predicted protein functional analysis in the yeast Saccharomyces cerevisiae cells depleted of functional AQPs revealed that the predicted proteins are able to transport water.
Description
Wydział Biologii
Sponsor
Keywords
Helix pomatia, akwaporyny, aquaporin, transport wody, water transport, estywacja, aestivation