Analityczne oznaczanie kannabinoidów w surowcach i produktach otrzymanych z konopi za pomocą UHPLC z detektorami UV-VIS i CORONA CAD

Abstract

Rozprawa dotyczy opracowania, optymalizacji i walidacji procedury UHPLC do analizy 19 kannabinoidów w surowcach i produktach z konopi. Zastosowano jedną procedurę rozdzielania w dwóch wariantach detekcji: UV-VIS/DAD i CORONA CAD. Rozdzielanie prowadzono na kolumnie Accucore C18, izokratycznie, z użyciem wody z 0,1% kwasu octowego i acetonitrylu (30:70, v/v), przy przepływie 0,5 mL/min i temperaturze 20 °C. Czas analizy wynosił 30 min. Sygnał ilościowy DAD rejestrowano przy 278 nm. Walidacja obejmowała selektywność, kalibrację, precyzję, dokładność, LOD, LOQ i odporność. Dla DAD zastosowano kalibrację liniową, a dla CAD regresję kwadratową z ważeniem 1/x lub 1/x². Zakres roboczy wynosił od LOQ do 200 lub 250 μg/mL, zależnie od analitu. LOD i LOQ mieściły się odpowiednio w zakresach 1–5 i 1–10 μg/mL. Ograniczoną rozdzielczość stwierdzono dla par CBND/CBDV, Δ⁹-THCA/CBC i CBCA/CBLA. Pełna ocena odporności wymaga uzupełnienia kryteriów akceptacji i analizy wyników. Procedurę zastosowano do oznaczania CBD w olejach oraz CBD i CBDA w materiale roślinnym. Uzyskanie wiarygodnych wyników wymagało kontroli par krytycznych, właściwego modelu kalibracji i oceny przydatności układu chromatograficznego.

This dissertation presents the development, optimisation and validation of a UHPLC procedure for the analysis of 19 cannabinoids in cannabis raw materials and derived products. A single chromatographic separation procedure was used with two detection modes: UV-VIS/DAD and CORONA CAD. Separation was performed on an Accucore C18 column under isocratic conditions using water containing 0.1% acetic acid and acetonitrile (30:70, v/v), at a flow rate of 0.5 mL/min and a column temperature of 20 °C. The analysis time was 30 min. The DAD signal used for quantification was recorded at 278 nm. Validation covered selectivity, calibration, precision, accuracy, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ), and robustness. Linear calibration was used for DAD, whereas quadratic regression with 1/x or 1/x² weighting was applied for CAD. The working range extended from the LOQ to 200 or 250 μg/mL, depending on the analyte. LOD and LOQ values ranged from 1 to 5 and from 1 to 10 μg/mL, respectively. Limited resolution was observed for the CBND/CBDV, Δ⁹-THCA/CBC and CBCA/CBLA pairs. A full robustness assessment requires further specification of acceptance criteria and analysis of the results. The procedure was applied to the determination of CBD in oils and CBD and CBDA in plant material. Obtaining reliable results required monitoring the separation of critical peak pairs, selecting an appropriate calibration model and assessing chromatographic system suitability.